בביולוגיה מולקולרית, בחירה טובה של חיץ והכנה לשלבים שונים של בידוד דנ"א יכולה להיות ההבדל בין מעבר לביטוי חלבונים או פתיחת ערכת מקסי-פריי אחרת להתחיל מחדש. למרות חשיבותם המהותית, מתכונים חיץ הם לעתים קרובות רק מתכונים שנכתב ללא הסבר או רציונליות עבור המרכיבים השונים. אחד כזה חיץ הוא גלוקוז- tris-EDTA או חיץ GTE.
$config[code] not foundמה זה GTE משמש?
GTE משמש resuspend כדורי תא חיידקי לפני lysing (שבירת פתוח) התאים קצירת ה- DNA פלסמיד בפנים. Lysozyme, אשר מרכך את קרום התא, הוא הוסיף לעתים קרובות יחד עם חיץ GTE. השגת ההשעיה הומוגנית של תאים שלמים במהלך שלב זה, כך הפתרון הוסיף תמוגה הוסיף יכול להגיע לכל התאים הוא המפתח להשגת תשואות DNA טוב. GTE נועד לעשות זאת תוך מתן סביבה יציבה לדנ"א.
גלוקוז עבור Osmolarity
50 מ מ (מילימטר) סוכר גלוקוז מתווסף למאגר GTE כדי לשמור על osmolarity שבו ריכוז המומס מחוץ לתאים קרוב לזה בתוך התאים. זה מונע תא תמוך בטרם עת, אשר יכול לגרום התשואות נמוכות יותר DNA עקב צבירה והשפלה. המרכיבים האחרים של המאגר גם לתרום osmolarity של הפתרון, אבל גלוקוז, להיות לא אלקטרוליט, היא בחירה טובה, כי זה לא להפריע למאפיינים של מאגר הפתרון.
Tris עבור יציבות pH
Tris הוא שם קצר עבור amisomethane (hydroxymethyl), שהוא חיץ pH נפוץ מאוד. במקרה של חיץ GTE, מלח חומצה (Tris-HCl) מתווסף למאגר בריכוז של 25 מ"מ. זה שומר על ה- pH של הפתרון ב 8.0 פיזיולוגיים כמעט, pH אידיאלי למניעת הידרוליזה חומצה (השפלה) של ה- DNA פלסמיד ותגובות בצד לא רצויות של מרכיבי התא השני.
EDTA מונע דנה הדרדרות
EDTA, או ethylenediaminetetraacetic חומצה, לוכדת או "chelates" יונים מתכת מתוך הפתרון, ומניעת מהם להשתתף בתגובות בצד לא רצויות. במאגר GTE, EDTA נוסף ב 10 מ"מ. מטרתו העיקרית היא במאגר כדי לעגל את אבץ, מגנזיום, סידן בחינם, ובכך למנוע השפלה דנ"א על ידי מסלולים מסוימים הדורשים מתכות אלה.
כמה טיפים חשובים
שמור על חיץ GTE שלך קר ולהפוך אותו בכמויות קטנות כדי למנוע את הצמיחה של חיידקים בלתי רצויים בו. סוכר pH נשלט לעשות עבור בינוני צמיחה גדולה. השתמש תמיד במים מטוהרים. מי ברז יכול להיות עודף של מתכת יונים מן הצינורות, אשר יכול להציף את היכולת של EDTA כדי ללכוד. אם אתה חושד נוכחות של התערבות RNA במדגם שלך, להוסיף RNase ב 100 מיקרוגרם למיליליטר למאגר GTE שלך כדי לחסל את הבעיה.
